Doğal ürünlerdeki biyoaktif bileşenlerin büyük çoğunluğunu polifenoller oluşturur. Polifenol kompozisyonlarının belirlemesinde en sık kullanılan analitik yöntemlerden biri Ters-Faz Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisidir. Analizler, kullanılan fenolik standartların sayısına ve türüne göre validasyonu yapılmış yöntemlere uygulanır. Bu çalışmada doğal ürünlerde yaygın olarak bulunan sekonder metabolitlerin ayrımında tercih edilen HPLC- fotodiyot dizisi (PDA) dedektörü ile 26 tane fenolik bileşen standardının belirlenmesi amaçlandı. Analiz C18 (250 mm x 4.6 mm, 5 μm; GL Sciences) kolonda gradient program kullanılarak yapıldı. HPLC yöntemi, tespit sınırını 0,019-0,072 μg/mL aralığında ve miktar belirleme sınırını 0,063-0,239 μg/mL aralığında belirleyecek şekilde geliştirildi. Tüm kalibrasyon eğrileri, belirtilen aralıkta R²>0.994 değerleri ile doğrusal ilişkiler sergiledi. Oluşturulan metot optimize edilmiş, tespit ve nicelik sınırları, doğruluk, tekrarlanabilirlik ve fenolik analiz için uygun geri kazanım verileri değerlendirilerek doğrulanmıştır. Optimize edilmiş metot ile doğal ürünlerin fenolik içeriklerinin değerlendirilmesi ve kantitatif tayininin hızlı ve güvenilir bir şekilde yapılabileceği sonucuna varılmıştır.
The predominant majority of bioactive compounds in natural products are polyphenols. Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is the most employed analytical method for determining the polyphenol profiles of natural products. Analyses are conducted based on methods validated according to the number and type of phenolic standards used. In this study, it was aimed to determine 26 phenolic compound standards with HPLC-fotodiot array (PDA) detector, which is preferred for the separation of secondary metabolites commonly found in natural products. The analysis was carried out utilizing a C18 column (250 mm x 4.6 mm, 5 μm; GL Sciences) with a gradient program. The HPLC method was developed, determining the limit of detection within the range of 0.019-0.072 μg/mL, and the limit of quantification within the range of 0.063-0.239 μg/mL. All calibration curves exhibited linear corelations with R² values exceeding 0.994 across the specified range. The developed method has been optimized and validated by assessing detection and quantification limits, accuracy, repeatability, and recovery data suitable for phenolic analysis. It has been concluded that the optimized method allows for the rapid and reliable evaluation of the phenolic content of natural products and their quantitative determination.
