Jiangella aurantiaca Enkapsülin Sisteminin Klonlanması, Ekspresyonu ve Karakterizasyonu


Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Karadeniz Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2023

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MİRAY ŞAHİNKAYA

Danışman: Ali Osman Beldüz

Özet:

Enkapsülinler, kendilerine özgü kargo proteinleri bulunan, doğal, bakteri kaynaklı ve
protein yapılı kapsüllerdir. Bu çalışmada, Jiangella aurantiaca 8K307’nın peroksidazenkapsülin
sistemi karakterize edildi. Ayrıca, enkapsülinle ilişkisiz Anoxybacillus
ayderensis A9'in oligo-1,6-α-glukosidazına, Dyp’ye ait olan kargo yükleme peptidi (CLP)
eklenerek, enkapsülinin oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki etkileri araştırıldı.
Enkapsülin, Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketli oligo-1,6-α-glukosidaz
genleri, rekombinant olarak üretildiler ve gen ekspresyonlarının ardından saf olarak elde
edildiler.
Enkapsülinin TEM ve DLS analizleri ile 24 nm’lik kapsül yapısı belirlendi. Kapsül
formun stabil olduğu fizyolojik koşullar belirlendi. Enkapsülinin, Dyp ve CLP etiketli
oligo-1,6-α-glukosidaz ile in vitro kapsülasyonları sağlandı. Zimogram ve Native PAGE
analizleri ile kapsülasyonlar tespit edildi.
Enkapsülinlenen ve serbest Dyp, enkapsülinlenen ve serbest oligo-1,6-α-glukosidaz
ve CLP etiketi bulunmayan oligo-1,6-α-glukosidazın, optimum pH, optimum sıcaklık ve
kinetik parametreleri belirlendi. Sürfaktanlar, metal şelatörler, indirgeyici ajanlar, organik
çözücüler ve metallerin Dyp, oligo-1,6-α-glukosidaz ve CLP etiketi bulunan oligo-1,6-α-
glukosidaz üzerindeki etkileri test edildi.
Sonuçta, enkapsülinin özel kargo proteini olan Dyp ve ilişkisiz kargo proteini olan
oligo-1,6-α-glukosidaz üzerindeki koruyucu etkileri ayrıntılı olarak karakterize edildi.