Amanita vaginata var. vaginata ve Tricholoma terreum Mantarlarındaki Esterolitik Aktiviteden Sorumlu Enzimlerin Karakterizasyonu
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Karadeniz Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2008
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Ümmühan Çakmak
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, Trabzon'un Maçka ilçesi, Lişer yaylasından toplanan Amanita vaginata var. vaginata ve Tricholoma terreum mantar türlerine ait numunelerde esterolitik aktivite gösteren enzimler karakterize edildi. Özütlerdeki esterolitik aktiviteden sorumlu enzimlerin varlığını ortaya koymak için doğal protein elektroforezi yapıldı, her bir numune için aktivite boyamasından sonra ikişer bant ortaya çıktı ve Rf değerleri hesaplandı. Özütlerin p-nitrofenil bütirat (pNPB) substratı varlığında en yüksek aktivite gösterdiği tespit edildi. Her iki mantar numunesi için optimum pH değerinin 8,0, optimum sıcaklığın ise 30?40 °C aralığında olduğu belirlendi. Lineweaver?Burk eğrisinden elde edilen Vmaks ve Km değerleri A. vaginata var. vaginata için sırasıyla 14,20 U/L ve 0,071 mM; T. terreum için ise 34,6 U/L ve 9,6 ? M olarak bulundu. Her iki mantar numunesinden hazırlanan özütlerde esterolitik aktivite gösteren enzimlerin pH kararlılıklarının 3,0?10,0 arasında sabit olduğu gözlendi. A. vaginata var. vaginata numunesi için yapılan ısıl kararlılık denemesinde en yüksek aktivite değerlerine 30 °C'de ulaşıldı. Aktivite genel anlamda 10?40 °C aralığında oldukça yüksek olup, zaman ilerledikçe fazla bir azalma göstermedi. 60?70 °C aralığında ise aktivitenin kaybolduğu gözlendi. T. terreum numunesi için ise 10?40 °C aralığında enzim aktivitesinin korunduğu tespit edildi. 80 °C'de ise aktivitenin kaybolduğu gözlendi. Esterolitik aktivite üzerinde metal iyonların etkisini incelemek için bazı metal iyonlarının klorür tuzları kullanıldı. Ayrıca NaN3, EDTA, PMSF, DTT gibi kimyasalların her bir mantar numunesindeki enzim aktivitesi üzerine etkileri incelendi ve I50 değerleri belirlendi. Bütün bu veriler, her iki mantar numunesinde de esterolitik aktivitenin varlığını göstermektedir. Ayrıca iki mantar için kısa karbon zincirli bir substrat olan pNPB mevcudiyetinde aktivitenin maksimum olması ve uzun karbonlu substratlar varlığında aktivitenin oldukça azalması veya tamamen kaybolması karakterize edilen enzimlerin gerçek esteraz sınıfı enzimler olabileceği sonucunu ortaya koymaktadır.Anahtar Kelimeler: Lipaz, Esteraz, Amanita vaginata var. vaginata, Tricholoma terreum,Mantar