Termofilik Thermus sp. NCCB 100425T Esterazının Saflaştırılması ve Biyokimyasal Karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Karadeniz Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2013

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Mehmet Ali TEKİNCANLI

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): MELİKE YILDIRIM AKATIN

Özet:

Bu çalışmada, Thermus sp. NCCB 100425T bakteriyal esterazı amonyum sülfat çöktürmesi ile ön saflaştırma işlemine tabi tutulduktan sonra, hidrofobik etkileşim kromatografisi ile tam olarak saflaştırıldı ve saf enzim biyokimyasal olarak karakterize edildi. Enzimin saflığı, doğal- ve SDS-PAGE kullanılarak ortaya konuldu. p-nitrofenil asetat (pNPA) substratı varlığında, enzimin optimum pH?sı 7,5, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, pNPA substratı varlığında Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 18,32 mM ve 96,15 U/mg protein olarak belirlendi. pH 4,0-9,0 arasında, 4 °C?de inkübasyona bırakılan saf enzimde aktivitenin 7. günün sonunda bütün pH?larda %85-90 oranında, 60 °C?de 7. günün sonunda ise pH 8,0?de %59±5,2 oranında korunduğu gözlendi. 30-60 °C?ler arasında 7 gün boyunca inkübe edilen enzimin orijinal aktivitesinin yaklaşık %80?ini koruduğu gözlendi. %10 nihai konsantrasyondaki etanol ve DMSO varlığında, enzim maksimum aktivitesinin %96±2,7 ve %78±2,5?ine sahip oldu. Ayrıca bazı metal iyonlarının enzim aktivitesini farklı oranlarda etkilediği tespit edildi. Bu sonuçlar, oldukça pH ve ısıl kararlı bir enzim olan Thermus sp. NCCB 100425T esterazının bazı endüstriyel ve/veya klinik uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olabileceğini göstermektedir.