Anoxybacillus gonensis Z4 suşundan ekstraselüler ?-amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Karadeniz Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2012

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: NİMET BALTAŞ

Danışman: Sevgi Kolaylı

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada, yeni bir termofilik bakteri olan Anoxybacillus gonensis Z4 suşundan ekstraselüler a-amilaz, jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı ve karakterize edildi. Saf enzim, doğal ve SDS-poliakrilamid jel elektroforezlerinde tek bir bant halinde belirlendi. Optimum ? -amilaz aktivitesi, pH'ın ve sıcaklığın bir fonksiyonu olarak, çözünür patates nişastası substratı kullanılarak belirlendi. Enzimin optimum pH'sı, çözünür patates nişastası varlığında, 5,5-10,5 arasında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı ise, 70 oC olarak belirlendi. Saf enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde 10 gün sonunda, +4 °C de aktivitesinin tamamını koruduğu, 70 °C' de % 65' ini koruduğu ve 90 °C' de aktivitesinin %43' ünü koruduğu gözlendi. Patates nişastası, amilopektin ve amiloz substratları için, Anoxybacillus gonensis Z4 ? -amilaz'nın Km değerleri, Lineweaver-Burk eğrisi yardımıyla, sırasıyla, 0,9 mg/mL, 1,3 mg/mL ve 0,5 mg/mL olarak bulundu. Vmaks değerleri ise sırasıyla 833,3 U/mg protein, 1000 U/mg protein ve 769 U/mg protein olarak belirlendi. EDTA, Hg2+, B4O7-2, OH-, CN- ve üre için hesaplanan IC50 değerleri sırasıyla 16,5 mM, 15,2 mM, 8,2 mM ve 10,9 mM olarak bulundu. Bu sonuçlar, elde edilen Anoxybacillus gonensis Z4 ?? amilazı, ısıl ve pH kararlılığı ve diğer özellikleri açısından endüstriyel uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olduğunu göstermektedir.