PLAGL2’NİN CRISPR/Cas9 YÖNTEMİYLE SUSTURULDUĞU HaCaT KERATİNOSİT HÜCRE HATTININ KARAKTERİZASYONU

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Karadeniz Teknik Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Tıp, Türkiye

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Ümit Uzun

Danışman: Tuba Dinçer

Özet:

Pleimorfik adenoma gen benzeri 2 (PLAGL2), N-terminalinde altı çinko parmak DNA bağlanma domaini bulunan bir transkripsiyon faktördür. PLAGL2’nin birçok kanser tipinde hücre çoğalmasını ve göçünü aktive ettiğinin gösterilmesi PLAGL2’nin onkogenik özelliğini öne çıkartırken, bazı hücrelerde hücre döngüsünü durdurması ve apoptozu tetiklemesi, tümör baskılayıcı olarak da etkin olabileceğine işaret etmektedir. Bugüne değin yapılan çalışmalar daha ziyade PLAGL2’nin karsinogezdeki rolünü tanımlamaya yönelik olmuştur. Receptörle etkileşen serin/treonin kinaz 4 (RIPK4)’ün epidermal gelişimdeki rolünün moleküler mekanizmasını anlamak amacıyla gerçekleştirdiğimiz çalışmamızda RIPK4 ve PLAGL2’nin mayada ve memeli keratinosit hücrelerinde özgül bir şekilde etkileştiği gösterildi. Bu bulgumuzu destekler biçimde epidermal farklılaşma sürecinde ifadesi değişen genlerin analiz edildiği yüksek çıktılı bir çalışmada PLAGL2’nin de bulunması, PLAGL2’nin bu süreçte görev aldığına dair hipotezimizi güçlendirdi. Bir proteinin fonksiyonunu analiz etmeye yönelik çalışmalardaki temel yaklaşımlardan biri ilgilenilen proteinin hücrede ifade edilmesini engelleyerek o proteinin hücresel süreçlerdeki rolünü araştırmaya dayalıdır. Bu hedefe yönelik güncel yaklaşımlardan biri CRISPR/Cas9 stratejisidir. Önerilen bu proje çalışması ile amaçlanan PLAGL2’nin epidermal gelişim üzerindeki rolünü anlamak için ilk etapta keratinosit hücrelerinin temel hücresel fonksiyonları üzerindeki rolünü araştırmaktır. Bu amaç doğrultusunda, ilk olarak keratinosit HaCaT hücre hattında PLAGL2 geni CRISPR/Cas9 sistemi ile knock-out edilerek (susturularak), PLAGL2 proteinin bu hücrelerde ekspresyonunun sonlandırılması hedeflenmektedir. Sonrasında da PLAGL2 knock-out keratinosit hücrelerde hücre morfolojisi ve hücre büyümesi, döngüsü, hücre hareketi, hücre ölümü ve hücre sinyali gibi temel hücresel fonksiyonlar incelenecektir.